HIV Genetik Direnç Testi Nasıl Çalışır?

Terapiye en iyi şekilde uyumu olan kişiler için bile, virüsün doğal mutasyonları nedeniyle zaman içinde bir miktar HIV ilacı direncinin gelişmesi beklenir. Diğer durumlarda, suboptimal yapışma dirençli HIV popülasyonlarının gelişmesine izin vererek, sonuçta tedavi başarısızlığına yol açtığında direnç hızla gelişebilir.

Tedavi başarısızlığı meydana geldiğinde, bu yeni dirençli virüs popülasyonunu baskılamak için alternatif ilaç kombinasyonları seçilmelidir. Genetik direnç testi Bu virüslerin olası antiretroviral ajanlara ne kadar duyarlı olduklarını tespit ederek, bir kişinin "viral havuzunda" dirençli mutasyon tiplerini tanımlayarak bunu kolaylaştırmaya yardımcı olur.

HIV'de genetik direnç testi için iki ana araç kullanılır: HIV genotipik analizi ve HIV fenotipik analizi.

Genotip ve Fenotip Nedir?

Tanım olarak, bir genotip basitçe bir organizmanın genetik yapısını ifade ederken, bir fenotip bu organizmanın gözlemlenebilir özellikleri veya özellikleridir.

Genotipik analizler (veya genotipleme), bir hücrenin genetik kodlaması veya DNA'sındaki kalıtsal talimatları tanımlayarak işlev görür. Fenotipik analizler (veya fenotiplendirme), bu talimatların farklı çevresel koşulların etkisi altında ifadesini onaylar.

Genotip ve fenotip arasındaki ilişki mutlak olmamakla birlikte, genotipleme, özellikle ilaç genetiğinde olduğu gibi, özellikle de genetik koddaki değişiklikler, özelliklerde veya özelliklerde beklenen değişikliklere yol açtığında, fenotipin tahmininde bulunabilir.

Öte yandan fenotiplendirme, "şimdi ve burada" olduğunu doğrular. Bir organizmanın, HIV farklı ilaçlara ve / veya ilaç konsantrasyonlarına maruz kaldığında olduğu gibi, çevresel baskıdaki spesifik değişikliklere verdiği tepkiyi değerlendirmeyi amaçlar.

HIV Genotiplemesini Açıklamak

HIV genotiplemesi genellikle direnç testi için kullanılan en yaygın teknolojidir. Testin amacı, genetik asitlerdeki spesifik genetik mutasyonları tespit etmektir. gag-pol virüsün bölgesi genom (veya genetik kod). Bu, ters transkriptaz, proteaz ve entegre enzimlerin - çoğu antiretroviral ilacın hedefi olan - DNA zincirinde kodlanan bölgedir.

İlk önce polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) teknolojisini kullanarak HIV genomunu yükselterek, laboratuvar teknisyenleri virüsün genetiğini çeşitli mutasyon tespit teknolojilerini kullanarak sıralayabilir (veya "haritalandırabilir").

Bu mutasyonlar (veya mutasyonların birikimi), tanımlanan mutasyonlarla virüsün farklı antiretroviral ilaçlara beklenen duyarlılığı arasındaki ilişkiyi analiz eden teknisyenler tarafından yorumlanır. Çevrimiçi veritabanları, test sekansını prototip "vahşi tip" virüsün (yani, dirençli mutasyon içermeyen HIV) karşılaştırması ile yardımcı olabilir.

Bu testlerin yorumlanması, daha fazla ilaç direnci seviyesine neden olan daha fazla sayıda anahtar mutasyonla birlikte, ilaca yatkınlığı belirlemek için kullanılır.

HIV Phenoytyping açıklanması

HIV fenotiplemesi, bir kişinin varlığında HIV virüsünün büyümesini değerlendirir, daha sonra aynı ilaçtaki vahşi tip virüs kontrolünün büyümesiyle karşılaştırır.

Genotipik analizlerde olduğu gibi, fenotipik testler HIV genomunun gag-pol bölgesini güçlendirir. Genetik kodun bu bölümü daha sonra kullanarak vahşi tip bir klon üzerine "aşılanır" rekombinant DNA teknolojisi. Elde edilen rekombinant virüs, memeli hücrelerini in vitro (laboratuarda) enfekte etmek için kullanılır.

Viral numune daha sonra,% 50 ve% 90 viral supresyona ulaşılana kadar artan farklı antiretroviral ilaç konsantrasyonlarına maruz bırakılır. Konsantrasyonlar daha sonra kontrol, vahşi tip numuneden elde edilen sonuçlarla karşılaştırılır.

Bağıl "kat" değişiklikleri, ilaca duyarlılığın belirlendiği değer aralığını sağlar. Dört katlı bir değişiklik, vahşi tipe kıyasla viral bastırmayı elde etmek için ilaç miktarının dört katına ihtiyaç duyulduğu anlamına gelir. Katlanma değeri arttıkça, virüsün belirli bir ilaca karşı duyarlılığı azalır.

Bu değerler daha sonra düşük klinik ve üst klinik aralıklara yerleştirilir, daha yüksek değerler daha yüksek ilaç direnci sağlar. (Örnek rapora bakınız.)

Genetik Direnç Testi Ne Zaman Yapılır?

ABD'de genetik direnç testi geleneksel olarak naif hastaların herhangi bir "kazanılmış" ilaç direncine sahip olup olmadıklarını belirlemek için yapılır. ABD'deki çalışmalar, bulaşan virüsün% 6 ila% 16'sının en az bir antiretroviral ilaca dirençli olacağını, yaklaşık% 5'inin birden fazla ilaç sınıfına karşı dirençli olacağını göstermektedir.

Genetik direnç testi ayrıca terapi gören bireylerde ilaç direncinden şüphelenildiğinde de kullanılır. Test, hasta başarısız rejimi alırken veya viral yük 500 kopya / mL'den büyükse tedavinin kesilmesinden sonraki dört hafta içinde gerçekleştirilir. Genotipik testler, genellikle daha az maliyetli oldukları, daha hızlı geri dönüş süreleri olduğu ve vahşi tip ve dirençli virüs karışımlarını tespit etmek için daha fazla hassasiyet sunan bu durumlarda genellikle tercih edilir.

Fenotipik ve genotipik testlerin bir kombinasyonu genellikle, özellikle de proteaz inhibitörlerine maruz kalanlar için, karmaşık, çoklu ilaç direnci olan kişiler için tercih edilir.